Positivo en S. pneumoniae ¿Ahora qué hago?

La determinación de la sensibilidad a los antimicrobianos es una de las tareas del laboratorio de microbiología clínica de mayor impacto en el manejo del paciente. Además, los estudios de sensibilidad son fundamentales para conocer las tendencias de resistencia en los microorganismos de importancia clínica y para definir la política de utilización de antimicrobianos. 

Fig 1. S. pneumoniae en agar sangre

Una vez confirmado un resultado a S. pneumoniae se realizan pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos, esto para ayudar a formular las recomendaciones para un tratamiento clínico.

Prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos

Existen varios métodos que permiten desarrollar esta actividad antimicrobiana, como lo son las pruebas de difusión en disco, pruebas de dilución en agar o microdilución en caldo  y las pruebas por difusión en agar de gradiente antimicrobiano, sin embargo, el más utilizado por su valor eficiencia-costo es el método de difusión en disco.

    Metodología:

A partir de la previa identificación, se realiza biomasa del microrganismo (en agar sangre) y se prepara el medio donde se va a llevar a cabo la prueba de susceptibilidad (agar Mueller-Hinton adicionado al 5%de sangre de carnero).

Fig2. Esquema de la metodología para las pruebas de susceptibilidad a antimicrobianos 

 

1.    Suspenda las colonias viables de un crecimiento de toda la noche en placa de agar sangre de carnero o agar chocolate en un tubo de caldo hasta alcanzar una suspensión bacteriana equivalente a una turbidez estándar de 0,5 en la escala de McFarland. Esta suspensión tiene que usarse en 15 minutos.

2.    Compare la densidad de la suspensión con la turbidez estándar de 0,5 en la escala de McFarland.

3.    Cuando logre la densidad exacta, introduzca un hisopo de algodón o dacrón en la suspensión bacteriana. Sáquelo del caldo y elimine el exceso de líquido presionando y rotando el hisopo contra la pared del tubo.

4.    Use el hisopo para inocular tres veces toda la superficie de la placa de agar de Mueller-Hinton suplementado, rotando la placa con un giro de 60 grados entre cada inoculación. Use el mismo hisopo con cada estría rotada, pero no reintroduzca el hisopo en el inóculo (la suspensión de células bacterianas).

5.    Deje secar el inóculo antes de colocar los discos en la placa (discos de oxacilina y ceftriaxona principalmente, y en el caso de la bacteria sea sensible a la oxacilina se ponen los discos de penicilina. El disco de cloranfenicol ya no es tan usado debido a los efectos secundarios). Esto normalmente toma unos minutos, pero nunca más de 15.

6.    Cuando la placa esté seca, coloque los discos de antimicrobianos en las placas. Use pinzas estériles para poner los discos en el agar Mueller-Hinton y presione suavemente para asegurar que los discos se adhieran al agar. La difusión de la droga en el disco comienza inmediatamente, por tanto, una vez que el disco toca la superficie del agar no debe ser movido.

7.    Incube las placas en posición invertida en atmósfera de CO2 al 5% durante 20-24 horas a 35°C. Si no se dispone de incubadora de CO₂ , se puede usar un frasco con una vela en extinción.

8.    Después de una incubación de toda la noche, mida el diámetro de cada zona de inhibición con una regla o un calibrador. Las zonas de inhibición en el medio que contiene sangre se miden desde el borde superior de la placa sin tapa. Debe tener cuidado de no tocar el disco ni la superficie del agar. Esterilice la regla ocasionalmente para prevenir la transmisión de bacterias. Las zonas de inhibición se miden como el diámetro, desde el borde de la última colonia visible. Registre los resultados en milímetros (mm).

9.    Interprete la susceptibilidad a los antimicrobianos de la cepa de la prueba (y compruebe que los resultados para la cepa de CC de S. pneumoniae. Se clasifican como resistente (R) y sensible (S).

Bibliografía:

Perilla, M. J., Ajello, G., Bopp, C., Elliott, J., Facklam, R., Knapp, J. S., ... & Dowell, S. F. (2009). Manual de laboratorio para la identificación y prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos de patógenos bacterianos de importancia para la salud pública en el mundo en desarrollo. Medicina & Laboratorio, 15(01-02), 69-91

Martínez-Martínez, L. (2003). El futuro de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos. Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. 21(52), 64-71