Para realizar un medio de cultivo para ver si se trata o no de S. pneumoniae es necesaria una muestra de esputo, el esputo es el producto de una expectoración la cual consiste en el acto de arrancar y arrojar por la boca mediante tos las flemas y secreciones que se depositen en la laringe, tráquea y bronquios.
Para realizar un examen directo con esputo se debe seleccionar una parte de la muestra que corresponde a la parte más densa o purulenta para posteriormente realizarle una coloración de Gram la cual permite el control de la calidad del esputo para evaluar el grado de contaminación con bacterias del tracto superior además de que se confirma mediante la observación si se trata de una bacteria gram positiva en cocos capsulada (Cacho-Calvo y cols., 2007).
Para evaluar la calidad del esputo obtenido se utiliza el sistema de graduación establecido por Murray y Washington (Tabla 12) en el cual se establece que la observación de un gran número de células epiteliales en los grupos 1 al 4 indican que se trata de una muestra contaminada con secreciones orofaríngeas mientras que la establecida con el numero 5 son las que se consideran clínicamente significativas y corresponden a aquellas muestras de esputo con <10 células epiteliales por campo y 25 leucocitos por campo (Cacho-Calvo y cols., 2007).
Tabla 12. Criterios de Murray y Washington para la evaluación de la calidad de las muestras de esputo. Para el cultivo de esputo se utilizan medios como el agar sangre y el agar chocolate los cuales se incuban en una atmosfera de microareofilia y atmósfera de CO2 al 5% en un periodo de 18-24 horas.
El agar sangre de carnero al 5% es un medio de cultivo enriquecido que esta suplementado con sangre de carnero, permite el crecimiento de microorganismos exigentes nutricionalmente y otorga una buena visualización de reacciones de hemolisis.
El agar chocolate es un medio de cultivo enriquecido y no selectivo que contiene glóbulos rojos que son lisados a un calentamiento de 56 °C (Pírez & Mota, 2006)
Streptococcus pneumoniae en los medios de cultivo se identifica de esta manera:
- Agar sangre: se observa α-hemolisis parcial formándose colonias pequeñas transparentes brillantes con halo verde brillante debido a la biliverdina producida por la ruptura de los eritrocitos contenidos en el medio.
- Agar chocolate: se observa el crecimiento de colonias lisas, pequeñas, redondas, mucoides, transparentes con α-hemolisis.
Sin embargo, es necesario confirmar la sospecha de la presencia de este patógeno utilizando diferentes técnicas de identificación bioquímica y las pruebas de susceptibilidad.
- Prueba catalasa: el fundamento de esta técnica se basa en encontrar o no la presencia de la enzima catalasa, la catalasa cataliza la degradación de agua oxigenada en agua y oxígeno, no se encuentra presente en los organismos aerobios por lo que S. pneumoniae es negativo a catalasa.
- Prueba de solubilidad en bilis: en esta prueba se detecta la lisis de las células en un tubo que contiene sales biliares, si el tubo se aclara o pierde turbidez el resultado es positivo.
- Prueba de susceptibilidad a optoquina: la optoquina inhibe el desarrollo de S. pneumoniae por lo que al colocar el disco con este antibiótico no habrá crecimiento alrededor de la optoquina.
(Castillo y cols., 2017).
Figura 1. Esquema general para evaluar muestra de esputo.
Como último punto se realiza la lectura de las pruebas bioquímicas y pruebas de susceptibilidad. Así mismo se realiza la interpretación de dichas pruebas y antibiograma para entregar el reporte de resultados.
Si se trata de una bacteria gram positiva de forma de diplococos, encapsulada, catalasa negativo, sensible a optoquina y positivo a solubilidad en bilis se trata se Streptococcus pneumoniae (Figura 2).
Figura 2. Identificación de Streptococcus pneumoniae.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
- Cacho-Calvo, M.A., Medeguer-Peinado, M.A., Oliver-Palomo, A., y Puig de la Bellacasa, J. (2007). Diagnóstico microbiológico de las infecciones bacterianas del tracto respiratorio inferior. Procedimientos en Microbiología Clínica. Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. EIMC. pp. 1-25
- Castillo, M. C., Córdova, G. L., Ganoza, E. M., García, M. O., Velásquez, M. L., & Sanabria, J. C. (2017). Evaluación comparativa de Agar Sangre de Carnero y Agar Sangre Humana en el aislamiento de Streptococcus beta hemolíticos de pacientes con faringitis del Hospital Almanzor Aguinaga Asenjo de Chiclayo, Perú. 2006. Revista Médica Vallejiana, 4(2), 148-154.
- Pírez, M., & Mota, M. (2006). Morfología y estructura bacteriana. Temas de bacteriología y virología médica, 23-42.
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