Prueba de solubilidad en bilis

Las colonias de neumococo son solubles en bilis y pueden desaparecer o aparecer como colonias aplastadas; por el contrario, las colonias de estreptococo resistentes a la bilis no se verán afectadas. 

Desarrollo de la prueba:

1. Tomar una asa de la cepa sospechosa de un crecimiento fresco en una placa de agar sangre y preparar una suspensión de células bacterianas en 0,5 mL de salina estéril. La suspensión de células bacterianas deberá ser turbia, similar a una turbidez estándar de 0,5 ó 1,0 en la escala de McFarland.

• Si el crecimiento en la placa de la prueba de optoquina es suficiente, la suspensión puede hacerse con las células bacterianas obtenidas de la estría específica donde se sospecha la presencia de S. pneumoniae. 

• Cuando el crecimiento es insuficiente para hacer una suspensión de densidad apropiada en 0,5 mL de salina estéril, inocule una placa de agar sangre con el crecimiento sospechoso e incube toda la noche (durante 18-24 horas a 35°C en una atmósfera enriquecida en CO2 ) para preparar un cultivo fresco. 

2. Dividir la suspensión en dos cantidades iguales (0,25 mL por tubo). Añadir 0,25 mL de salina a uno de los tubos y 0,25 mL de desoxicolato de sodio al 2% (sales biliares) al otro. 

3. Para hacer una concentración al 2% de sales biliares, añadir 0,2 g de desoxicolato de sodio a 10 ml de salina. 

4. Agitar los tubos suavemente y colocarlos en baños maría a 35°C–37°C durante 2 horas. 

4. Examinar los tubos periódicamente para detectar lisis de las células en el tubo que contiene sales biliares. Si el tubo se aclara o pierde turbidez, el resultado es positivo. 

Prueba de sensibilidad en bilis

• Las cepas en las que la suspensión en el tubo se torna clara en la prueba de solubilidad en bilis deben ser notificadas como “solubles en bilis.”  Las cepas para las cuales la turbidez en el tubo de control de salina permanece igual, deben ser notificadas como negativas para la solubilidad en bilis (o “insoluble en bilis” o “resistente a la bilis”).