Pruebas serológicas

Inmunodiagnóstico

Este tipo de serología diagnostica utilizan pruebas que permiten la interacción antígeno anticuerpo para encontrar la presencia de enfermedades infecciosas con la finalidad de confirmar un diagnóstico especifico cuando el patógeno es difícil de detectar por medios directos. 

Mediante una muestra de sangre del paciente se analiza el suero en el cual se buscan inmunoglobulinas específicas que actúan durante la fase de infección. Cuando la infección está en su fase activa las IgM (de respuesta primaria) están presentes y son posibles de detectar en suero, al transcurrir de 2-4 semanas después del primer encuentro con el patógeno se encuentran presentes las IgG (respuesta secundaria) en el suero por lo que se dice que se presentó infección en un momento pasado. Puesto que se ha realizado la defensa del hospedador utilizando por ejemplo la opsonización de la bacteria (Prescott et al., 2004). 

Figura 1. Acciones inmunitarias adaptativas mediadas por inmunoglobulinas.

Un resultado positivo solo indica que el paciente esta o estuvo en contacto con una infección por lo que se utilizan pruebas para la detección de antígenos que emplean anticuerpos de captura para detectar en las muestras clínicas antígenos específicos propios del microorganismo. En estas pruebas generalmente los anticuerpos de captura se encuentran unidos a un soporte sólido, como las bolitas de látex recubiertas con anticuerpos específicos para detectar el material capsular y es visto al ojo humano mediante la observación de aglutinación con látex. 

Entre las estructuras de Streptococcus pneumoniae se encuentra la cápsula, que es una estructura que envuelve a la bacteria externa a la pared celular la cual tiene una naturaleza polisacárida compleja. Esta cápsula es la responsable de la patogénesis de las infecciones neumocócicas, esta composición capsular permite clasificar más de 90 serotipos capsulares de S. pneumoniae y a 45 serogrupos de esta (Brooks et al., 2010). 

Identificación de serotipo mediante prueba quellung 

La identificación de los serotipos se realiza mediante una reacción antígeno-anticuerpo utilizando antisueros específicos que induce a que la cápsula genere un tipo de hinchazón a la cual se le conoce como "quellung" (Preado, 2001). 

Figura 2. Prueba de Quellung. Se observa la "hinchazón" que presenta la capsula de S. pneumoniae. 

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 

• Brooks, G. F., Butel, J. S., Ornston, L. N., Jawetz, E., Melnick, J. L., & Adelberg, E. A. (2010). Microbiología médica de Jawetz, Melnick y Adelberg (25ª ed). McGraw Hill-Lange. México. Recuperado el 16 de agosto de 2021, de https://booksmedicos.org/ (pp. 83, 85 y 87). 
• Prescott, L.M., Harley, J.P. & Klein, D.A. (2004). Microbiología. (5a ed.). México, D.F.: McGraw-Hill. (pp. 101, 102, 109).
• Preado, V. (2001). Conceptos microbiológicos de Streptococcus pneumoniae: BASIC MICROBIOLOGICAL ASPECTS. Revista chilena de infectología, 18, 6-9.

Positivo en S. pneumoniae ¿Ahora qué hago?

La determinación de la sensibilidad a los antimicrobianos es una de las tareas del laboratorio de microbiología clínica de mayor impacto en el manejo del paciente. Además, los estudios de sensibilidad son fundamentales para conocer las tendencias de resistencia en los microorganismos de importancia clínica y para definir la política de utilización de antimicrobianos. 

Fig 1. S. pneumoniae en agar sangre

Una vez confirmado un resultado a S. pneumoniae se realizan pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos, esto para ayudar a formular las recomendaciones para un tratamiento clínico.

Prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos

Existen varios métodos que permiten desarrollar esta actividad antimicrobiana, como lo son las pruebas de difusión en disco, pruebas de dilución en agar o microdilución en caldo  y las pruebas por difusión en agar de gradiente antimicrobiano, sin embargo, el más utilizado por su valor eficiencia-costo es el método de difusión en disco.

    Metodología:

A partir de la previa identificación, se realiza biomasa del microrganismo (en agar sangre) y se prepara el medio donde se va a llevar a cabo la prueba de susceptibilidad (agar Mueller-Hinton adicionado al 5%de sangre de carnero).

Fig2. Esquema de la metodología para las pruebas de susceptibilidad a antimicrobianos 

 

1.    Suspenda las colonias viables de un crecimiento de toda la noche en placa de agar sangre de carnero o agar chocolate en un tubo de caldo hasta alcanzar una suspensión bacteriana equivalente a una turbidez estándar de 0,5 en la escala de McFarland. Esta suspensión tiene que usarse en 15 minutos.

2.    Compare la densidad de la suspensión con la turbidez estándar de 0,5 en la escala de McFarland.

3.    Cuando logre la densidad exacta, introduzca un hisopo de algodón o dacrón en la suspensión bacteriana. Sáquelo del caldo y elimine el exceso de líquido presionando y rotando el hisopo contra la pared del tubo.

4.    Use el hisopo para inocular tres veces toda la superficie de la placa de agar de Mueller-Hinton suplementado, rotando la placa con un giro de 60 grados entre cada inoculación. Use el mismo hisopo con cada estría rotada, pero no reintroduzca el hisopo en el inóculo (la suspensión de células bacterianas).

5.    Deje secar el inóculo antes de colocar los discos en la placa (discos de oxacilina y ceftriaxona principalmente, y en el caso de la bacteria sea sensible a la oxacilina se ponen los discos de penicilina. El disco de cloranfenicol ya no es tan usado debido a los efectos secundarios). Esto normalmente toma unos minutos, pero nunca más de 15.

6.    Cuando la placa esté seca, coloque los discos de antimicrobianos en las placas. Use pinzas estériles para poner los discos en el agar Mueller-Hinton y presione suavemente para asegurar que los discos se adhieran al agar. La difusión de la droga en el disco comienza inmediatamente, por tanto, una vez que el disco toca la superficie del agar no debe ser movido.

7.    Incube las placas en posición invertida en atmósfera de CO2 al 5% durante 20-24 horas a 35°C. Si no se dispone de incubadora de CO₂ , se puede usar un frasco con una vela en extinción.

8.    Después de una incubación de toda la noche, mida el diámetro de cada zona de inhibición con una regla o un calibrador. Las zonas de inhibición en el medio que contiene sangre se miden desde el borde superior de la placa sin tapa. Debe tener cuidado de no tocar el disco ni la superficie del agar. Esterilice la regla ocasionalmente para prevenir la transmisión de bacterias. Las zonas de inhibición se miden como el diámetro, desde el borde de la última colonia visible. Registre los resultados en milímetros (mm).

9.    Interprete la susceptibilidad a los antimicrobianos de la cepa de la prueba (y compruebe que los resultados para la cepa de CC de S. pneumoniae. Se clasifican como resistente (R) y sensible (S).

Bibliografía:

Perilla, M. J., Ajello, G., Bopp, C., Elliott, J., Facklam, R., Knapp, J. S., ... & Dowell, S. F. (2009). Manual de laboratorio para la identificación y prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos de patógenos bacterianos de importancia para la salud pública en el mundo en desarrollo. Medicina & Laboratorio, 15(01-02), 69-91

Martínez-Martínez, L. (2003). El futuro de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos. Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. 21(52), 64-71